A vatikáni múzeumok látogatásához érvényes jegyet kell bemutatni. A Vatikáni Állam méltóságának megőrzése érdekében olyan szabályok vannak érvényben, mint például az öltözködési szabályok. A Sixtus-kápolnába való belépés, amelyet a múzeumi belépő tartalmaz, megköveteli ezen irányelvek betartását.
A látogatóknak tisztelettudóan kell öltözködniük, amikor belépnek a szent terekbe. A vállat, térdet és derekat fedő ruházat kötelező, ezért a rövidnadrágokat és a pólókat kerülni kell. A nem megfelelő öltözékű látogatók belépését megtagadhatják.
A nagyméretű tárgyakat, például a csomagokat a ruhatárban kell tárolni. A Vatikáni Bazilikába induló látogatóknak nem szabad a múzeumi ruhatárban hagyni a tárgyakat, mert később nem biztos, hogy vissza tudják venni azokat.
A múzeumok a látogatók biztonságát olyan kötelező eljárásokkal helyezik előtérbe, mint például a testhőmérséklet ellenőrzése. Emellett a rászorulók számára jobb megközelíthetőséget biztosítanak, és minden látogató számára barátságos környezetet biztosítanak.
Bizonyos tárgyakat nem lehet a múzeumban tartani a műtárgyak biztonsága és megőrzése érdekében. A tiltott tárgyak közé tartoznak többek között a következők:
A Vatikáni Múzeumokban ingyenes ruhatári szolgáltatás áll rendelkezésre, ahol a tiltott holmik elhelyezésére van lehetőség.
*A kísérőkutyákat pórázon és szájkosárral kell vezetni, és a terápiás háziállatokat csak igazolással engedik be.